蛋白質(zhì)含量檢測(cè)方法概述

蛋白含量檢測(cè)試劑盒(BCA法)

產(chǎn)品名稱

通用名：蛋白質(zhì)含量檢測(cè)試劑盒(BCA法)

原理

在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中多肽鍵結(jié)構(gòu)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu+，BCA與Cu+特異性結(jié)合成穩(wěn)定的紫色復(fù)合物，該復(fù)合物在562nm處有*的光吸收值，在一定范圍內(nèi)，光吸收值與蛋白質(zhì)濃度成正比，溶液顏色的深淺與蛋白質(zhì)含量成正比，可根據(jù)光吸收值測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。

實(shí)驗(yàn)試劑

試劑A     100ml   (4℃保存)

試劑B     30ml   (4℃保存)

4mg/ml BSA標(biāo)準(zhǔn)品    0.5ml   (-21℃保存)

儀器

酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)，工作波長(zhǎng)540nm~590nm，*工作波長(zhǎng)562nm,如無此波長(zhǎng)，建議優(yōu)先使用490nm波長(zhǎng)。

適用范圍

不含還原劑的蛋白樣品。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 工作液配制：將試劑A與試劑B按50:1的比例混合均勻。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：用純化水將2mg/ml的BSA標(biāo)準(zhǔn)品依次稀釋為以下濃度1600、800、400、200、100、50、25ug/ml。注意用純化水標(biāo)記空白。

3. 參照下表上樣

充分混勻后，在37℃條件下孵育30分鐘或室溫下靜置2小時(shí)。

4. 在酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)上，以562nm波長(zhǎng)下，空白管調(diào)0后測(cè)定各管OD值。

5. 以O(shè)D值為Y軸，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為X軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

6. 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找待測(cè)樣品濃度，注意稀釋后的樣品所測(cè)濃度需乘以稀釋倍數(shù)。

說明

1. BCA法的檢測(cè)范圍是20-2000ug/ml，若樣本超過此范圍需再酌情稀釋。

2. 樣本中含有還原劑，EDTA或葡萄糖濃度大于10mM時(shí)不可直接使用BCA法，樣本經(jīng)液體樣品蛋白抽取試劑沉淀后，可*去除干擾物質(zhì)。

3. 在37℃孵育30分鐘或室溫下靜置2小時(shí)對(duì)檢測(cè)比較便利，但嚴(yán)格來講，此時(shí)反應(yīng)尚未達(dá)到終點(diǎn)，通常每10分鐘A562下OD值升高約2.3%，在10分鐘內(nèi)測(cè)定不會(huì)影響精度。

4. 可測(cè)量吸附于固相支持物如酶標(biāo)版、瓊脂糖、親和層析凝膠上的蛋白。

5. 本法僅適用于科研。