豬偽狂犬病病毒野毒株檢測試劑盒使用步驟

產品名稱：豬偽狂犬病病毒野毒株檢測試劑盒

規    格： 50T
檢測方法： 實時熒光 PCR

保存方式： 2~8℃

有 效 期： 1年

產    地： 中國

用    途： 僅用于科研實驗

訂購流程：豬偽狂犬病病毒野毒株檢測試劑盒

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1. 樣品處理（樣本處理區）

1.1 樣本前處理

組織：取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿，勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中；
液體標本：取適量標本13000rpm離心2min，棄上清。
1.2 DNA提取

1) 對上述處理好的標本加入40ul 核酸提取液，100℃恒溫處理10分鐘，13,000 rpm離心5分鐘，取上清液轉移至新的1.5ml EP管，-20℃保存；
2. 試劑配制（試劑準備區）

根據代檢測樣本總數，設所需要的PCR反應管管數為N（N=樣本數+1

管陰性對照+1管陽性對照），體系配制如下表：

試劑

WSSV 反應液

酶液

用量（樣本數為N）

20μl

1μl

3. 加樣（樣本處理區）

將步驟1提取的DNA、陽性質控品、陰性質控品各取4μl，加入相應的

反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR擴增（核酸擴增區）

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內；

5. 結果分析判定

結果分析條件設定
設置基線（baseline）：一般情況下，對ABI 7500、7700等儀器設為6-15cycle，對PE5700設為3-15cycle,對MJ Research Option2設為6-12cycle。特殊情況可對基線適當調整。
設置閾值（threshold）:以閾值線剛超過陰性對照擴增曲線（無規則的噪音線）的至高點。
結果判斷
陽性：檢測樣本Ct值小于等于35.0，且曲線有明顯的指數增長期；
可疑：檢測樣本Ct值大于35.0且小于40.0，重復一次實驗，如果Ct值仍小于40.0，且曲線有明顯的指數增長期，為陽性，否則為陰性；
陰性：檢測不到樣本Ct值或Ct值為40。
6. 對檢驗結果的解析

實驗室環境污染，試劑污染，標本交叉污染會出現假陽性結果；試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果。

7. 質控標準

陰性質控品：擴增曲線無對數生長期或無Ct值顯示；
陽性質控品：擴增曲線有明顯對數生長期，且Ct值≤32;
以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。